本文標題:細菌、植物細胞和哺乳動物細胞-生物學技術分析
信息分類:站內新聞 新聞來源：未知 發布時間：2017-10-24 0:59:21
細菌、植物細胞和哺乳動物細胞-生物學技術分析
應用分子生物學技術分析復雜的基因組，首先必須制備純的高
分子量DNA。
從細菌、植物細胞和哺乳動物細胞的基因組DNA的純化方法開
始，這些方法由兩部分組成：先是溫和裂解細胞及溶解DNA的技術
，接著采用幾種化學和酶學方法中的任一種，以去除雜蛋白、RNA
及其他的大分子。這里所述的基本方法廣泛適用于各種起始材料。
本章還簡要地匯編了進一步純化和濃縮核酸的一般方法。
實際上分子生物學的所有方法從某種程度上講都需要進行核酸
的分級分離。層析技術對于某些應用是合適的，比如分離雙鏈核酸
和單鏈核酸、分離質粒與基因組DNA以及從細胞裂解物碎片中分離
基因組DNA。然而，凝膠電泳法因比其他方法具有更高的分離度，
因而成為一般情況下首選的分離方法。凝膠電泳分離法既可以是分
析型的，也可以是制備型的。
總的來說，應用凝膠電泳技術分離核酸比分離蛋白質要容易。
核酸是帶均勻負電荷的分子,基本不存在影響遷移率的復雜結構。
影響核酸在凝膠上的遷移有多種重要的變量，這些變量包括：核酸
的構象、凝膠孔徑的大小、所用的電壓梯度以及緩沖液的鹽濃度，
其中最基本的是凝膠孔徑的大小，它決定了能被分離的片段的大小
。在實際操作中，這意味著較大孔徑的瓊脂糖凝膠用于分離>500--
10 000 bp的片段，而較小孔徑的聚丙烯酰胺凝膠或篩分型瓊脂糖
凝膠則用于分離<1 000 bp的片段。
通常需從凝膠電泳分離的復雜的混合物中鑒別出某個特定的片
段，這可以采用Southern雜交技術來完成，即先將所有片段從凝膠
上轉移至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，然后用標記的核酸探針進行雜
交，以鑒別出目的片段。本章全面總結了固定已分離的DNA片段的
方法與所需材料及相關的雜交技術。這些方法為對復雜基因組中的
單拷貝或多拷貝序列進行定位作圖及鑒別作出了巨大貢獻，并且促
進了最初的真核基因克隆實驗的完成。
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